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2025年09月11日 14:23 來源:
定義與功能
2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖(2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxy-D-glucose),簡(jiǎn)稱NBD-Glc,是一種熒光標(biāo)記的葡萄糖類似物。該化合物將天然葡萄糖分子中的2號(hào)位羥基替換為含NBD(7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑)熒光團(tuán)的氨基結(jié)構(gòu),使其既保留葡萄糖的細(xì)胞攝取能力,又具備可檢測(cè)的熒光信號(hào)。作為葡萄糖代謝研究的重要工具,它被廣泛用于追蹤細(xì)胞對(duì)糖的攝取過程,尤其在腫瘤細(xì)胞、神經(jīng)元和免疫細(xì)胞等高代謝活性細(xì)胞中應(yīng)用廣泛。由于其可通過葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(如GLUT1)進(jìn)入細(xì)胞,NBD-Glc成為研究糖代謝異常、胰島素響應(yīng)及能量調(diào)控機(jī)制的理想探針。
熒光特性與光學(xué)表現(xiàn)
2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖在藍(lán)光激發(fā)下發(fā)出明亮的綠色熒光,最大激發(fā)波長(zhǎng)約465 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)約535 nm,與FITC濾光片兼容,便于在常規(guī)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀上使用。其熒光強(qiáng)度隨環(huán)境極性變化而增強(qiáng),在疏水環(huán)境中更亮,適用于膜結(jié)合或細(xì)胞內(nèi)定位研究。盡管其量子產(chǎn)率中等,但因良好的細(xì)胞通透性和特異性攝取,仍能提供清晰的成像對(duì)比度。該探針適合活細(xì)胞實(shí)時(shí)成像,無(wú)需固定或透化處理,可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)葡萄糖攝入速率與分布變化。其英文名稱準(zhǔn)確反映其化學(xué)結(jié)構(gòu),是代謝示蹤領(lǐng)域常用的標(biāo)準(zhǔn)化熒光糖探針之一。
結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成
2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖(的分子由兩部分構(gòu)成:D-葡萄糖骨架和共價(jià)連接的NBD熒光團(tuán)。其英文名稱明確指出其為2-脫氧-D-葡萄糖的衍生物,其中2號(hào)碳上的羥基被NBD修飾的氨基取代。NBD基團(tuán)通過酰胺鍵與葡萄糖環(huán)相連,形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。該分子保持了葡萄糖的立體構(gòu)型,確保其能被細(xì)胞表面的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白識(shí)別并內(nèi)吞。分子量適中,水溶性良好,適合生理?xiàng)l件下的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。其結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)避免了磷酸化位點(diǎn)的封閉,因此可在細(xì)胞內(nèi)積累而不被進(jìn)一步代謝,有利于長(zhǎng)時(shí)間觀察。這種“可進(jìn)入但不代謝”的特性使其成為評(píng)估葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效率的優(yōu)選工具。
理化性質(zhì)與穩(wěn)定性
2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖為黃色至淺橙色固體,易溶于水、DMSO及緩沖液,配制方便。其英文名稱規(guī)范且被國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)收錄。產(chǎn)品通常以凍干粉形式提供,建議在-20°C避光保存以防止NBD基團(tuán)光降解。溶液狀態(tài)應(yīng)分裝冷凍,避免反復(fù)凍融。該化合物在pH 6.5–8.0范圍內(nèi)穩(wěn)定,強(qiáng)酸或強(qiáng)堿可能破壞NBD結(jié)構(gòu)導(dǎo)致熒光淬滅。雖然具有一定的光敏性,但在短時(shí)間光照下仍可獲得可靠信號(hào)。其低細(xì)胞毒性使其適用于多種活細(xì)胞系統(tǒng),包括原代細(xì)胞和細(xì)胞系。由于不參與糖酵解,NBD-Glc在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定積累,便于定量分析攝取水平。
應(yīng)用優(yōu)勢(shì)與主要功能
2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖的核心優(yōu)勢(shì)在于其模擬天然葡萄糖的攝取行為并自帶熒光信號(hào),英文名稱準(zhǔn)確體現(xiàn)其化學(xué)本質(zhì)。它主要用于研究細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)活性,如評(píng)估胰島素刺激下的GLUT4轉(zhuǎn)位、腫瘤細(xì)胞的Warburg效應(yīng)、神經(jīng)元能量需求等。在藥物篩選中,可用于測(cè)試化合物對(duì)糖代謝的影響。此外,該探針也應(yīng)用于炎癥、糖尿病和神經(jīng)退行性疾病模型中,作為代謝功能的生物標(biāo)志物。其操作簡(jiǎn)便、響應(yīng)快速、無(wú)需放射性同位素,相比傳統(tǒng)2-DG[3H]更具安全性和實(shí)用性,是現(xiàn)代細(xì)胞代謝研究中不可或缺的非侵入性熒光工具。
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